Veguheztina enerjiyê ya rezonansê ya fluorescence (FRET)
Veguheztina enerjiya rezonansê ya fluorescence (FRET) pêvajoyek veguheztina enerjiyê ya ne-radyatîf e ku tê de enerjiya rewşa heyecan a donor bi navbeynkariya cotên elektrîkê yên navmolekularî ve tê veguheztin rewşa heyecan a qebûlker.Ev pêvajo foton nagire û ji ber vê yekê ne tîrêj e.Ev azmûn xwedan avantajên bilez, hesas û sade ye.
Rengê ku di ceribandina FRET de tê bikar anîn dikare yek be.Lê di pir sepanan de, rengên cûda bi rastî têne bikar anîn.Bi kurtasî, veguheztina enerjiya rezonansê ya ronahiyê veguheztina cotek dîpolan ji donor (rengdêr 1) ber bi pejirandî (renga 2) ve gava ku koma xêrxwaz heyecan e.Bi gelemperî, spektruma belavkirinê ya koma fluorophore Donor bi spekrûya vegirtinê ya koma Acceptor re hevgirtî ye."Gava ku dûrahiya di navbera her du fluorophore de guncan be (10 - 100 A), veguheztina enerjiya fluorophore ji donor berbi qebûlker dikare were dîtin."Rêbaza veguheztina enerjiyê bi avahiya kîmyewî ya receptorê ve girêdayî ye:
1. Veguhere lerizîna molekular, ango ronahiya ronî ya veguheztina enerjiyê winda dibe.(Receptor vemirandina ronahiyê ye)
2. Emîsyonê ji receptor bi xwe tundtir e, di encamê de di spektruma floransê ya duyemîn de sorbûnek çêdibe."(Receptor emiterên ronahiyê ne).
Koma donor (EDANS) û genê qebûlker (DABCYL) bi yekrengî bi substrata xwezayî ya proteaza HIV-ê ve girêdayî ne, û dema ku substrat neyê qut kirin, DABCYL dikare EDANS-ê bitemirîne û dûv re ji florînê re neyête dîtin.Li ser qutbûna proteaza HIV-1, EDANS êdî ji hêla DABCYL ve nayê qut kirin, û EDANS luciferases dikare paşê were tespît kirin.Hebûna înhîbîtorên proteazê dikare bi guheztinên di tundiya floransê ya EDANS de were şopandin.
Peptîdên FRET ji bo lêkolîna netaybetmendiya peptîdase amûrên hêsan in.Ji ber ku pêvajoya wê ya reaksiyonê dikare bi domdarî were şopandin, ew ji bo tespîtkirina çalakiya enzîmê rêbazek hêsan peyda dike.Şewqa ku piştî hîdrolîza bendên peptîdê ji hêla xêrxwaz/qebûlker ve hatî hilberandin pîvanek çalakiya enzîmê di hûrgelên nanomolar de peyda dike.Dema ku peptîd FRET saxlem be, ew wendabûnek ji nişka ve ya birûska hundurîn nîşan dide, lê gava ku girêdanek peptîdê ya li hemberê xêrxwaz/qebûldar dişkê, ew felqek berdide, ku dikare bi domdarî were tesbît kirin û paşê çalakiya enzîmê dikare were pîvandin.
Dema şandinê: Tebax-14-2023